@MASTERSTHESIS{ 2016:142434839,
 	title = {efeito do laser em baixa intensidade sobre a expressão gênica e proteica de mediadores de macrófagos J774 induzidos a diferenciação},
 	year = {2016},
 	url = "http://bibliotecatede.uninove.br/handle/tede/2855",
 	abstract = "As interações entre o tecido e os macrófagos que o invadem após a ocorrência de uma lesão são determinantes para a evolução do seu reparo. Neste sentido, o laser em baixa intensidade (LBI) tem sido muito utilizado no tratamento de diferentes lesões teciduais no âmbito clínico e no experimental, mas pouco se conhece a respeito dos seus efeitos sobre os macrófagos. Os objetivos deste projeto foram avaliar o efeito do LBI (660 nm e 780 nm) sobre a expressão gênica e proteica de 12 produtos de macrófagos induzidos a diferenciação para os fenótipos M1, M2a e M2c. Macrófagos da linhagem J774 foram ativados/polarizados para os três fenótipos por 24h, irradiados com laser vermelho (660 nm) e infravermelho (780 nm) nas mesmas combinações de parâmetros dosimétricos (70 mW, 17,5 J/cm2, 1J). Passados os períodos de incubação de 4 e 24 h, foi realizada a análise da expressão gênica das quimiocinas (CXCL2, CCL2, CCL3, CCL4), citocinas (IL-1β, IFNγ, IL-6, TNFα, IL-13) e fatores de crescimento (TGFβ1, IGF1 e VEGFA) por meio de PCR array. O sobrenadante das culturas dos diferentes grupos experimentais (após 24h das irradiações) foi utilizado para avaliar a produção das diferentes proteínas de acordo com o perfil característico de cada fenótipo. Macrófagos não irradiados e não ativados serviram como controle. Foram realizados três experimentos independentes para dosagem proteica e dois experimentos independentes para avaliação da expressão gênica. Os macrófagos induzidos para fenótipo M1 (tratamento com LPS+IFN-) apresentaram um aumento na expressão gênica de IL-6 e uma diminuição na expressão dos genes CCL2, CCL4, CXCL2 e TNFα em relação aos macrófagos não ativados no período de 24 h. Na dosagem proteica, os macrófagos ativados apresentaram um aumento na produção de CCL4 e IL-6 em relação aos macrófagos não ativados. Adicionalmente, macrófagos induzidos ao fenótipo M2a (tratamento com IL-4), mostraram um aumento na expressão gênica de TGFβ1 (24 h) e CCL3, CCL4, CXCL2 e TNFα (4 h) quando comparados com as células do grupo controle. Já a polarização para o fenótipo M2c (tratamento com IL-10 + Dexametasona), induziu um aumento na expressão gênica de CXCL2 (4 h), CCL3 e IL-1β (24 h). Na avaliação do tratamento com Laser foi observado que a irradiação com 660 nm
  
 provocou uma diminuição na expressão dos genes CCL3, CXCL2 e TNFα (4 h) e um aumento na expressão de IL-1β (4 h) e CCL2, CXCL2 e TNFα (24 h) nos macrófagos M1. Nos macrófagos M2a, esta mesma irradiação ocasionou uma diminuição na expressão gênica de CCL3, CXCL2 e TNFα (4 h). Neste mesmo contexto, os macrófagos induzidos para fenótipo M2c, que foram irradiados com o LBI de 660 nm apresentaram uma diminuição na expressão dos genes CXCL2, TNFα e IL-1β (4 h) e TNFα (24 h). Além disso, o tratamento com laser infravermelho de 780 nm foi capaz de provocar um aumento na expressão dos genes CCL2, IL- 1β e TGFβ1 (4 h) seguida de uma diminuição na expressão dos genes CCL3, IL-6 e TGFβ1 (24 h). Em relação a dosagem proteica, foi observada uma diminuição na produção de IL-6 e TNFα por macrófagos ativados e irradiados em relação aos somente ativados. Ainda foi visto que o LBI infravermelho provocou um aumento na expressão de TGFβ1 (4 h) e uma diminuição na expressão gênica de CCL4 (4 h), CCL3 e TGFβ1 (24 h) nos macrófagos ativados para perfil M2a. Além do mais, na ativação para fenótipo M2c, esta mesma irradiação gerou aumento na expressão gênica de TNFα (4 h) seguido de diminuição na expressão de CCL2, CCL3, CCL4, TNFα, IL-1β e TGFβ1 (em 24 h). Os resultados destas avaliações permitem concluir que embora a linhagem celular J774 seja amplamente utilizada para avaliação dos efeitos de diferentes terapias, sua resposta não se apresentou fidedignamente como esperado nas diferentes polarizações deste estudo. Em relação ao tratamento com laserterapia, as irradiações com LBI de 660 nm e 780 nm, demonstraram capacidade de modular a expressão gênica nos diferentes perfis fenotípicos. Mas, somente o laser infravermelho (780 nm) foi capaz de diminuir a expressão gênica e proteica de mediadores pró-inflamatórios quando aplicado em macrófagos de fenótipo M1 e de modular a expressão gênica de TGFβ1 em macrófagos M2a, o que poderia explicar a diminuição inflamatória da fase inicial e a ausência de fibrose observada nos tecidos lesionados irradiados com LBI.",
 	publisher = {Universidade Nove de Julho},
 	scholl = {Programa de Pós-Graduação em Biofotônica Aplicada às Ciências da Saúde},
 	note = {Saúde}
}