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Tipo do documento: Dissertação
Título: Efeito do laser de baixa intensidade na apoptose e estresse oxidativo em células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo submetidas a toxicidade por doxorrubicina
Título(s) alternativo(s): Effect of low level laser on apoptosis and oxidative stress on mesenchymal stem cells derived from adipose tissue submitted to doxorubicin toxicity
Autor: Lima, Rafael do Nascimento de 
Primeiro orientador: Serra, Andrey Jorge
Primeiro membro da banca: Serra , Andrey Jorge
Segundo membro da banca: Silva Junior, Jose Antonio
Terceiro membro da banca: Pinto, Jose Renato
Resumo: Contextualização: doxorrubicina é um quimioterápico amplamente utilizado no tratamento de doenças hematológicas e neoplasias. No entanto, a doxorrubicina também causa danos em células sadias (exemplo cardiomiócitos), situação que é persistente mesmo após o fim de ministração da droga. Estas implicações justificam ferramentas que, de alguma forma, abrandem os efeitos adversos da doxorrubicina em células não doentes, principalmente cardíacas. Destaque-se o emprego da terapia com células- tronco, em que efeitos cardioprotetores têm sido reportados. Todavia, a doxorrubicina também impõe citotoxicidade às células-tronco transplantadas, reduzindo seu potencial terapêutico. Objetivo: analisar se o Laser de Baixa Intensidade (LBI) reduz apoptose e estresse oxidativo em células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo (CTMA’s) submetidas a toxicidade por doxorrubicina. Material e Métodos: CTMA’s na concentração de 1×105/0,1 mL de DMEM foram plaqueadas em placa de 96 poços para composição dos seguintes sets experimentais: Controle - CTMA’s não tratadas com doxorrubicina e/ou LBI; D25 e D50 - CTMA’s incubadas com doxorrubicina nas concentrações de 25 µg/mL e 50 µg/mL, respectivamente; D25 + LBI / D50 + LBI - CTMA’s irradiadas com 0,2 J, 0,4 J e 0,7 J de LBI (660 nm) e incubadas com doxorrubicina nas concentrações de 25 µg/mL e 50 µg/mL, respectivamente. A viabilidade e apoptose celular foram determinadas por citometria de fluxo com marcação por 7AAD e Anexina V, respectivamente. A permeabilização celular com DCFH foi utilizada como marcador de espécies reativas de oxigênio (EROs). O conteúdo intracelular de ATP foi determinado em ensaio de luminescência em espectrofotômetro. As citocinas IL-6, IL-10 e TNF foram analisadas através de ELISA. Resultados: irradiações de 0,4 e 0,7 J resultaram em maior concentração de CTMA viáveis independente das concentrações de doxorrubicina. Resultados similares foram observados para os ensaios de apoptose em células incubadas com 50 µg de doxorrubicina e irradiadas com 0,2 e 0,4 J. Considerando que 0,4 J foi efetiva em aumentar a viabilidade e reduzir apoptose das CTMA’s na concentração de 50 µg, nós direcionamos para continuar os experimentos somente com esta dose de energia e concentração da droga. Assim, 0,4 J inibiu o aumento de EROs nas CTMA’s, porém, não resultou em maior concentração de ATP intracelular. Para IL-6, o grupo irradiado teve maior expressão quando comparado ao grupo controle. Para IL-10 e TFN, não houve diferença entre os grupos. Conclusão: o LBI reduziu a mortalidade, apoptose e estresse oxidativo de CTMA’s submetidas a toxicidade por doxorrubicina.
Abstract: Background: doxorubicin is a chemotherapy agent widely used on the treatment of hematologic diseases and neoplasia. However, doxorubicin causes cell damage in healthy cells (e.g. Cardiomyocytes), a situation that is persistent even after the end of drug administration. These implications justify tools that in some way lessen the adverse effects of doxorubicin on non-diseased cells, especially in the heart. We highlight the use of stem cell therapy, in which cardioprotective effects have been reported. However, doxorubicin also imposes cytotoxicity on transplanted stem cells, reducing its therapeutic potential. Objective: to analyze whether the Low Intensity Laser (LIL) reduces apoptosis and oxidative stress in mesenchymal stem cells derived from adipose tissue (MSCA) submitted to doxorubicin toxicity. Material and Methods: MSCA at the concentration of 1×105/0.1 mL of DMEM were plated in a 96-well plate for the composition of the following experimental sets: Control - MSCA untreated with doxorubicin and/or LBI; D25 and D50 - MSCA incubated with doxorubicin at concentrations of 25 μg/mL and 50 μg/mL, respectively; D25 + LIL/D50 + LIL - MSCA irradiated with 0.2 J, 0.4 J and 0.7 J LIL (660 nm) and incubated with doxorubicin at concentrations of 25 μg/mL and 50 μg/mL, respectively. Cell viability and apoptosis were determined by flow cytometry with 7AAD and Annexin V, respectively. Cell permeabilization with DCFH was used as a marker of reactive oxygen species (ROS). Intracellular ATP content was determined by spectrophotometer luminescence assay. Cytokines IL-6, IL-10 and TNF were analyzed by ELISA. Results: irradiations of 0.4 and 0.7 J resulted in a higher concentration of viable MSCA independent of doxorubicin concentrations. Similar results were observed for the apoptosis assays in cells incubated with 50 μg of doxorubicin and irradiated with 0.2 and 0.4 J. Considering that 0.4 J was effective in increasing the viability and reducing apoptosis of the MSCA at the concentration of 50 μg, we directed to continue the experiments only with this dose of energy and concentration of the drug. Thus, 0.4 J inhibited the increase of ROS in MSCA, however, it did not result in a higher concentration of intracellular ATP. For IL-6, the irradiated group increased expression when compared to the control group. For IL-10 and TNF, there was no difference between groups. Conclusion: LIL reduced mortality, apoptosis and oxidative stress of MSCA undergoing doxorubicin toxicity.
Palavras-chave: doxorrubicina
células-tronco mesenquimais
laser de baixa intensidade
insuficiência cardíaca
doxorubicin
mesenchymal stem cells
low intensity laser
heart failure
Área(s) do CNPq: CIENCIAS DA SAUDE
Idioma: por
País: Brasil
Instituição: Universidade Nove de Julho
Sigla da instituição: UNINOVE
Departamento: Saúde
Programa: Programa de Pós-Graduação em Biofotônica Aplicada às Ciências da Saúde
Citação: Lima, Rafael do Nascimento de. Efeito do laser de baixa intensidade na apoptose e estresse oxidativo em células-tronco mesenquimais derivadas do tecido adiposo submetidas a toxicidade por doxorrubicina. 2017. 41 f. Dissertação( Programa de Pós-Graduação em Biofotônica Aplicada às Ciências da Saúde) - Universidade Nove de Julho, São Paulo.
Tipo de acesso: Acesso Aberto
URI: http://bibliotecatede.uninove.br/handle/tede/2646
Data de defesa: 18-Dez-2017
Aparece nas coleções:Programa de Pós-Graduação em Biofotônica Aplicada às Ciências da Saúde

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