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Tipo do documento: Dissertação
Título: Aspectos morfológicos do músculo esquelético durante o processo de reparo após inoculação de células C2C12 e irradiação com laser de baixa potência
Título(s) alternativo(s): Morphological aspects of skeletal muscle during repair after C2C12 cell moculation and radiation with low-level laser
Autor: Santos, Lucas Andreo Dias dos 
Primeiro orientador: Corrêa, João Carlos Ferrari
Primeiro coorientador: Fernandes, Kristianne Porta Santos
Segundo coorientador: Corrêa, Fernanda Ishida
Primeiro membro da banca: Corrêa, João Carlos Ferrari
Segundo membro da banca: Carvalho, Flávio Aimbire Soares de
Terceiro membro da banca: Corrêa, Fernanda Ishida
Quarto membro da banca: Ferrari, Raquel Agnelli Mesquita
Resumo: As células satélites (CS) estão presentes no tecido muscular adulto e são ativadas após uma lesão muscular. O laser de baixa potência (LBP) já demonstrou interferir de forma positiva durante o processo de reparo muscular modulando suas diferentes fases, mas pouco se sabe sobre seus efeitos quando associado à inoculação celular. Portanto, o objetivo do estudo foi analisar o efeito do LBP após inoculação de células satélites musculares da linhagem C2C12 sobre o processo de reparo do músculo esquelético do rato após criolesão. Foram utilizados ratos Wistar, divididos aleatoriamente em 4 grupos: (1) Controle, (2) Lesão, (3) Lesão+C2C12 (4) Lesão+C2C12+LBP. A criolesão foi realizada por duas aplicações com um bastão resfriado em nitrogênio líquido diretamente no músculo tibial anterior (TA). A inoculação das células musculares C2C12 foi realizada imediatamente após a criolesão utilizando 1x106 células diretamente no local da lesão com uma seringa de calibre 30 com profundidade de 2 mm calibrada através de limitadores. Após duas horas da inoculação, foi aplicado o LBP (AsGaAl, 780 nm, 10 J/cm2, 40 mW, 3,2 J, 10 segundos por ponto sendo 8 pontos de irradiação) diariamente, sendo os períodos de análise de 1, 3 e 7 dias. Os aspectos morfológicos foram analisados qualitativamente e quantitativamente por coloração HE. Posteriormente, foi realizada a análise qualitativa e quantitativa das fibras de colágeno por Picrosirius e marcação de CD68+ por imunohistoquímica. Os dados foram expressos em média e erro padrão da média (ANOVA/Tukey). Os resultados demonstraram que após um dia, três e sete dias houve aumento na deposição de colágeno do grupo lesão+C2C12+LBP quando comparado ao grupo lesão e ao grupo lesão+C2C12. Além disso, após sete dias houve aumento do número de vasos sanguíneos no grupo lesão+C2C12 quando comparado aos grupos lesão e lesão+C2C12+LBP. Nesse mesmo período, houve diminuição no número de fibras musculares imaturas no grupo lesão+C2C12+LBP quando comparado aos grupos lesão e lesão+C2C12. Não houve diferença significante em relação ao número de células inflamatórias, mionecrose e na marcação de CD68 em todos os grupos avaliados, nos três períodos de análise. Portanto, os achados permitem concluir que a inoculação de células satélites C2C12 de camundongos modulou alguns aspectos do processo inflamatório incluindo aumento de vasos maduros e não apresentou influência sobre o infiltrado inflamatório tanto em quantidade quanto em tipo, mionecrose e fibras musculares imaturas. E, quando feita à associação com o LBP, houve apenas aumento na deposição de colágeno em 7 dias e não houve a modulação dos demais aspectos avaliados.
Abstract: Satellite cells (SC) are present in adult muscle tissue and are activated after a injury. The low-level laser therapy (LLLT) has shown step in positively during muscle repair process by modulating different phases, but little is known about its effects when combined with cell inoculation. Therefore, the objective of the study was to analyze the effect of LLLT after inoculation of muscle satellite cells of C2C12 on the repair process of skeletal muscle of rat after cryoinjury. Wistar rats were randomly divided into 4 groups: (1) control, (2) injury, (3) Injury + C2C12 (4) Injury + C2C12 + LLLT. The cryoinjury was carried out by two applications with a cold bat in liquid nitrogen directly into the tibialis anterior muscle (TA). Inoculation of C2C12 muscle cells was performed immediately after cryoinjury utilizing 1x106 cells directly into the lesion site with a 30 needle with a depth of 2 mm sized through limiters. After two hours of inoculation LLLT (GaAlAs, 780 nm, 10 J / cm2, 40 mW, J 3.2, 10 seconds per point being 8 irradiation points) was applied daily, and the analysis periods was 1, 3 and 7 days. The morphological aspects were analyzed qualitatively and quantitatively by HE staining. Subsequently, the qualitative and quantitative analysis of collagen fibers by Picrosirius and marking of CD68 + by immunohistochemistry was performed. Data were expressed as mean and standard error of the mean (ANOVA / Tukey). The results showed that after one day, three and seven days there was an increase in collagen deposition of the group injury + C2C12 + LLLT compared to injury group and injury + C2C12 group. Moreover, after seven days there was an increase in the number of blood vessels in the lesion + C2C12 group compared to injury and injury + C2C12 + LLLT grous. In the same period, there was a decrease in the number of immature muscle fibers in injury + C2C12 + LLLT group when compared to the groups injury and injury + C2C12. There was no significant difference in the number of inflammatory cells, myonecrosis and marking of CD68 in all the groups in the three periods of analysis. Therefore, the findings show that inoculation of C2C12 satellite cells of mice modulated some aspects of the inflammatory process including increased mature vessels and had no effect on the inflammatory infiltrate, myonecrosis and immature muscle fibers. And when he made the association with LLLT, there was only an increase in collagen deposition in 7 days and there was no modulation of the other aspects evaluated.
Palavras-chave: terapia a laser de baixa intensidade
terapia baseada em transplante de células e tecidos
músculo esquelético
low-level laser therapy
cell- and tissue-based therapy
skeletal muscle
Área(s) do CNPq: CIENCIAS DA SAUDE
Idioma: por
País: Brasil
Instituição: Universidade Nove de Julho
Sigla da instituição: UNINOVE
Departamento: Saúde
Programa: Programa de Pós-Graduação em Ciências da Reabilitação
Citação: Santos, Lucas Andreo Dias dos. Aspectos morfológicos do músculo esquelético durante o processo de reparo após inoculação de células c2c12 e irradiação com laser de baixa potência. 2015. 57 f. Dissertação( Programa de Pós-Graduação em Ciências da Reabilitação) - Universidade Nove de Julho, São Paulo.
Tipo de acesso: Acesso Restrito
URI: http://bibliotecadigital.uninove.br/handle/tede/1323
Data de defesa: 27-Feb-2015
Appears in Collections:Programa de Pós-Graduação em Ciências da Reabilitação

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